Quando i risultati delle analisi di laboratorio non corrispondono al certificato di analisi (COA) del fornitore: una guida pratica alle analisi degli ingredienti botanici

Un ingrediente botanico viene consegnato con un certificato di analisi che riporta un valore di 98,01 TP3T. Il vostro laboratorio analizza la partita e riporta un valore di 95,11 TP3T.

È opportuno rifiutare il materiale, richiedere una sostituzione o ripetere l'analisi?

Innanzitutto, occorre verificare se i due laboratori abbiano misurato la stessa caratteristica utilizzando gli stessi criteri di rendicontazione. Differenze nella preparazione dei campioni, negli standard di riferimento, nella filtrazione e nei calcoli possono portare a risultati apparentemente contraddittori.

Questa guida spiega cosa verificare prima di trarre una conclusione e in che modo le attrezzature di laboratorio, la vetreria e i materiali di consumo influenzano l’indagine.

Nota editoriale: Changhong Chemical e Longchang Chemical sono società affiliate appartenenti allo stesso gruppo aziendale.

1. Verificare il significato della percentuale riportata

Prima di confrontare i numeri, confronta le loro definizioni.

Una voce come “98% mediante HPLC” lascia diverse domande senza risposta:

• Si tratta della percentuale dell'area cromatografica o di un dosaggio quantitativo?
• Il risultato è riportato "tal quale", essiccato o anidro?
• Si riferisce a un singolo composto identificato o a un gruppo di composti?
• Si tratta di un limite specificato nelle specifiche tecniche o del risultato misurato per quel lotto?

Una scheda tecnica del prodotto descrive i requisiti di accettazione. Un certificato di analisi (COA) di lotto riporta i risultati o le dichiarazioni di conformità relative a un determinato lotto. Questi documenti hanno finalità diverse.

Un esempio ipotetico: 98.0% e 95.1% potrebbero essere compatibili

Supponiamo che un materiale abbia:

Se il metodo richiede solo una correzione per l'acqua, la relazione è la seguente:

Contenuto effettivo = Contenuto anidro × (1 − Frazione d'acqua)

98,01 TP3T × 0,970 = 95,061 TP3T

In questo esempio semplificato, un risultato pari a circa 95,11 TP3T non è necessariamente in contraddizione con 98,01 TP3T. La base di rendicontazione spiega l’apparente differenza.

Questo calcolo ha scopo puramente illustrativo e non rappresenta il risultato relativo a nessun prodotto commerciale. Non deve essere applicato alle percentuali di area cromatografica né a metodi che richiedono correzioni diverse.

Inoltre, non bisogna sostituire automaticamente il contenuto d’acqua con la perdita alessiccante. La perdita alessiccante può includere altre sostanze volatili, mentre l’analisi Karl Fischer determina specificamente la presenza di acqua, se applicata correttamente al campione. Sartorius spiega questa distinzione.

2. Verificare il campione prima di procedere alla risoluzione dei problemi dello strumento

Iniziamo dalla tracciabilità.

Verificare che il certificato di analisi (COA) del fornitore, l’etichetta del contenitore e la documentazione di laboratorio indichino lo stesso lotto e la stessa qualità. Successivamente, esaminare le modalità di prelievo e di manipolazione del campione da analizzare.

Tra le domande che vale la pena porsi figurano:

• Il campione è stato prelevato secondo un piano di campionamento adeguato?
• È stata eseguita la miscelazione richiesta prima del sottocampionamento?
• Il contenitore è stato esposto all'umidità o a condizioni di stoccaggio inadeguate?
• I campioni del fornitore e del laboratorio di destinazione sono stati prelevati in momenti diversi?
• È disponibile un campione conservato ai fini dell'indagine?

Effettuare ripetutamente dei test su una piccola porzione non permette di stabilire se tale porzione sia rappresentativa dell'intera spedizione.

Registrare la cronologia dei campionamenti e della conservazione prima di aprire un altro contenitore o preparare ulteriori soluzioni. Queste informazioni aiutano a distinguere un problema di campionamento da una differenza analitica.

3. Ripasso: pesatura e diluizione insieme

La concentrazione che raggiunge lo strumento dipende da ogni fase della preparazione.

La leggibilità della bilancia non corrisponde al peso minimo del campione

Una bilancia con una risoluzione di 0,1 mg non garantisce automaticamente una precisione accettabile per ogni campione di massa ridotta. Il suo peso minimo utilizzabile dipende dalle prestazioni in condizioni operative reali e dall’incertezza accettabile per la misurazione. METTLER TOLEDO illustra questi fattori.

Verificare che sia il campione che lo standard di riferimento siano stati pesati entro il campo di funzionamento certificato della bilancia.

Da leggere anche:

• Elettricità statica, correnti d’aria e letture instabili.
• Assorbimento di umidità durante la pesatura.
• Materiale residuo sui recipienti di pesatura o sugli strumenti di trasferimento.
• Errori di trascrizione nelle messe registrate.

Considerare gli oggetti in vetro come parte della misurazione

Per la preparazione quantitativa, utilizzare strumenti volumetrici adeguati al metodo e al grado di precisione richiesto.

Verificare il volume del matraccio, l'impostazione della pipetta, la sequenza di diluizione e le unità di misura. Assicurarsi che tutti i trasferimenti richiesti siano stati quantitativi e che le soluzioni siano state miscelate adeguatamente.

Ricostruire il calcolo completo della diluizione sulla base dei dati originali. Una diluizione intermedia tralasciata o l'inserimento di un volume errato possono causare una discrepanza costante anche quando i cromatogrammi appaiono normali.

4. Approfondimento su estrazione e filtrazione

Una soluzione limpida non dimostra, di per sé, che la preparazione del campione sia stata adeguata.

Per i materiali botanici, verificare se il metodo di preparazione specificato consenta di recuperare adeguatamente il costituente di interesse dalla matrice del campione. Le variabili rilevanti possono includere la composizione del solvente, il tempo di estrazione, la temperatura e il rapporto tra la massa del campione e il volume del solvente.

Modificare queste condizioni senza averne verificato l'effetto può rendere difficile il confronto dei risultati.

Un filtro a siringa può modificare non solo il contenuto di particelle

La scelta del filtro richiede di prestare attenzione alla compatibilità con i solventi, al recupero dell’analita e alle sostanze rilasciate dal filtro. La dimensione dei pori da sola non è sufficiente. Agilent approfondisce i temi del recupero di filtrazione e della purezza chimica.

Durante lo sviluppo di un metodo o nel corso di uno studio approvato, tra i confronti utili possono figurare:

Definire i criteri di accettazione in base alle prestazioni previste per il metodo. Non dare per scontato che una membrana adatta a un ingrediente garantisca le stesse prestazioni anche per un altro.

Qualsiasi preparazione di confronto deve rimanere compatibile con il sistema analitico; i campioni contenenti particelle non devono essere iniettati al solo scopo di ottenere un risultato “non filtrato”.

5. Distinguere la percentuale di area nell'HPLC dall'analisi quantitativa

Un picco principale di grande entità è un’informazione utile, ma non definisce ogni aspetto della qualità del materiale.

La percentuale di area cromatografica esprime la proporzione della risposta integrata del rivelatore attribuita a un picco in condizioni specificate. L'analisi quantitativa utilizza una procedura definita di calibrazione e calcolo per stimare la quantità di un analita.

Questi risultati non sono automaticamente intercambiabili.

La risposta del rivelatore varia a seconda dei composti e il metodo deve separare adeguatamente l’analita dalle interferenze rilevanti. Agilent descrive la stima della purezza basata sull’area, mentre le linee guida di Merck per lo sviluppo dei metodi spiegano l’importanza della specificità e di altre caratteristiche di validazione. Stima della purezza con Agilent, Sviluppo di metodi HPLC presso Merck.

Per poter confrontare i risultati, richiedi informazioni sufficienti a comprendere:

• L'approccio alla misurazione e alla taratura.
• Identità dello standard di riferimento e valore assegnato.
• Condizioni cromatografiche rilevanti.
• Regole di integrazione e di calcolo.
• Risultati relativi all'idoneità del sistema.
• Base di rendicontazione e fattori di correzione.

Un cromatogramma privo del contesto relativo al metodo e ai calcoli potrebbe non essere sufficiente a risolvere la discrepanza.

Si devono inoltre distinguere le iniezioni ripetute dalle preparazioni indipendenti. Le iniezioni ripetute da una singola fiala servono principalmente a valutare la ripetibilità delle iniezioni e degli strumenti. La pesatura e la preparazione separate dei campioni aiutano a valutare la variabilità introdotta nelle fasi precedenti della procedura.

6. Verificare lo standard di riferimento e la cronologia delle soluzioni

Due laboratori possono utilizzare apparecchiature simili e ottenere comunque risultati diversi se i loro standard o le loro soluzioni differiscono.

Esaminare la documentazione relativa allo standard di riferimento, il valore assegnato, le condizioni di conservazione e il periodo di validità applicabile. Verificare che eventuali correzioni richieste siano state applicate in modo coerente e non siano state conteggiate due volte.

Esaminare quindi le soluzioni preparate:

• Sono stati analizzati entro un periodo di stabilità prestabilito?
• Le condizioni di conservazione erano adeguate?
• Era possibile che si verificasse l'evaporazione?
• Sono state registrate precipitazioni visibili o altri cambiamenti?
• Lo standard e il campione sono stati trattati in modo coerente con il metodo?

Queste domande aiutano a stabilire se il confronto riguardi soluzioni equivalenti, piuttosto che semplici impostazioni equivalenti degli strumenti.

7. Richiedi un pacchetto di documentazione utile

Una trattativa efficace con un fornitore inizia con una richiesta precisa.

Per gli ingredienti botanici, richiedere le specifiche aggiornate e il certificato di analisi (COA) relativi al lotto in questione, insieme a informazioni sufficienti sui metodi analitici per poter interpretare i risultati riportati. Gli acquirenti che valutano i materiali tramite Estratti di Longchang  È possibile utilizzare la seguente lista di controllo quando si richiedono documentazione e campioni.

Una richiesta concisa potrebbe essere la seguente:

Si prega di fornire le specifiche attuali e il certificato di analisi (COA) relativi al lotto proposto, inclusi il riferimento al metodo di analisi, la base di rendicontazione e le informazioni relative allo standard di riferimento. Per facilitare il confronto con la nostra ispezione in entrata, si prega inoltre di fornire, ove disponibili, le informazioni relative alla preparazione dei campioni, ai calcoli e alla cromatografia.

Non tutti i fornitori sono in grado di rivelare integralmente il proprio metodo proprietario. L'obiettivo immediato è quello di ottenere informazioni sufficienti per effettuare un confronto tecnico significativo.

8. Analizzare le differenze senza effettuare test fino a quando qualcosa non risulta conforme

Se la discrepanza persiste, concordare lo svolgimento di un’indagine documentata.

Conservare i risultati e i dati originali. Verificare i calcoli e la cronologia delle operazioni di preparazione, quindi selezionare ulteriori analisi sulla base di un’ipotesi specifica, ad esempio una differenza nella base di rendicontazione, una perdita legata ai filtri o un’estrazione incompleta.

Tra i possibili passi successivi figurano la preparazione autonoma, l'analisi di un campione conservato in modo adeguato o l'organizzazione di test comparativi con un metodo concordato. Ulteriori analisi devono seguire le procedure di qualità del laboratorio; un risultato favorevole ottenuto in una ripetizione dell'analisi non invalida automaticamente il risultato originale.

L'indagine deve essere proporzionata alla decisione. La conferma di una discrepanza nei risultati analitici non risolve questioni distinte relative all'identità, alla presenza di contaminanti o all'idoneità all'applicazione prevista.

Il risultato più utile è una spiegazione documentata della differenza, supportata da prove, e una base chiara per accettare, respingere o valutare ulteriormente il materiale.